實時定量PCR儀通過熒光化學物質(如熒光染料或熒光探針)標記DNA產物,在PCR指數擴增期實時捕獲熒光信號強度變化。系統(tǒng)自動采集每個循環(huán)的熒光增量數據,經配套軟件進行基線校正和閾值設定后,利用標準曲線或ΔΔCt法計算初始模板濃度。這一技術實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,且整個PCR過程可實現(xiàn)自動化,耗時短,操作方便,不易污染。
實時定量PCR儀選型建議:
在選擇實時定量PCR儀時,需綜合考慮以下因素:
實驗需求:明確待檢測的靶標分子類型、檢測靈敏度要求及平臺適用范圍。例如,基因表達分析可選擇4通道系統(tǒng),而病毒載量檢測則建議選配ROX校正染料通道。
性能指標:關注溫控系統(tǒng)的精度、靈敏度、擴增速度及均勻性。性能越好的PCR儀,實驗穩(wěn)定性和準確性越高。
品牌和售后服務:選擇品牌的產品,確保產品質量和售后服務可靠。同時,考慮品牌產品的應用范圍和配件選擇。
預算:根據預算選擇適合的儀器。在預算有限的情況下,可選擇性能穩(wěn)定、性價比較高的PCR儀。